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https://repositorio.ufms.br/handle/123456789/9288| Tipo: | Trabalho de Conclusão de Curso |
| Título: | Produção, purificação e caracterização bioquímica de uma amilase produzida pelo fungo termofílico Rasamsonia composticola |
| Autor(es): | Ribeiro, João Victor Souza |
| Primeiro orientador: | Zanoelo, Fabiana Fonseca |
| Primeiro membro da banca: | Zanoelo, Fabiana Fonseca |
| Segundo membro da banca: | Vargas, Isabela Pavão |
| Terceiro membro da banca: | Galeano, Rodrigo Mattos Silva |
| Resumo: | Amilases ou enzimas complexo amilolítico fazem parte uma classe de enzimas responsáveis por hidrolisar ligações glicosídicas do amido, e podem ser classificadas como: α-amilase, β-amilase e glucoamilase. Estas enzimas são utilizadas em diversos setores industriais, com destaque na indústria alimentícia. Os fungos filamentosos se destacam na produção de amilases, utilizando substratos agroindustriais como fonte de carbono. Este trabalho teve como objetivo otimizar a produção, purificação e caracterização bioquímica de uma amilase produzida pelo fungo termofílico Rasamsonia composticola. Para a produção de amilase, foi realizado o cultivo em fermentação em estado semi-sólido (FES) utilizando resíduos agroindustriais de baixo custo. Também foram avaliados parâmetros como fontes de carbono, misturas das fontes de carbono, nitrogênio e efeito da temperatura no crescimento, na produção enzimática e tempo de cultivo. A purificação da amilase foi realizada em duas etapas cromatográficas: troca iônica (DEAE- Fractogel) seguida de cromatografia hidrofóbica (Phenyl-Sepharose). A enzima foi caracterizada bioquimicamente, quanto ao efeito do pH, temperatura, íons e substratos. Dentre os resíduos utilizados, a mistura de casca de maracujá e casca extrusada de laranja em FES (1:1) foi melhor (3,87 U/mL para a produção da amilase). A melhor fonte de nitrogênio para a produção de amilase foi a peptona (1%). A temperatura e tempo de cultivo mais adequado para a produção de amilases foram de 40ºC e 96 horas. A amilase foi purificada 18 vezes com um rendimento de 69%. O pH e temperatura ótimos foram 4,6 e 55ºC, respectivamente. A enzima hidrolisou amido (100%) e xilana (59%). Foi ativada na presença de CaCl2 (264%) e inibida por HgCl2 , CuSO4 e EDTA. Sugerimos que se trata de uma glucoamilase (E.C. 3.2.1.3.) com as características obtidas. O fungo termofílico Rasamsonia composticola produziu amilase a partir de resíduos agroindustriais de baixo custo, e a purificação e caracterização demonstram potencial da enzima para um futuro uso biotecnológico |
| Abstract: | Amylases or amylolytic complex enzymes are part of a class of enzymes responsible for hydrolyzing glycosidic bonds in starch, and can be classified as: α-amylase, β-amylase and glucoamylase. These enzymes are used in various industrial sectors, with emphasis on the food industry. Filamentous fungi stand out in the production of amylases, using agro-industrial substrates as a carbon source. This work aimed to optimize the production, purification and biochemical characterization of an amylase produced by the thermophilic fungus Rasamsonia composticola. For the production of amylase, cultivation was carried out in semi-solid state fermentation (FES) using low-cost agro-industrial residues. Parameters such as carbon sources, mixtures of carbon sources, nitrogen and the effect of temperature on growth, enzyme production and cultivation time were also evaluated. Amylase purification was carried out in two chromatographic steps: ion exchange (DEAE-Fractogel) followed by hydrophobic chromatography (Phenyl-Sepharose). The enzyme was characterized biochemically, regarding the effect of pH, temperature, ions and substrates. Among the waste used, the mixture of passion fruit peel and extruded orange peel in FES (1:1) was better (3.87 U/mL for the production of amylase). The best nitrogen source for amylase production was peptone (1%). The most suitable temperature and cultivation time for the production of amylases were 40ºC and 96 hours. Amylase was purified 18 times with a yield of 69%. The optimum pH and temperature were 4.6 and 55ºC, respectively. The enzyme hydrolyzed starch (100%) and xylan (59%). It was activated in the presence of CaCl2 (264%) and inhibited by HgCl2, CuSO4 and EDTA. We suggest that it is a glucoamylase (E.C. 3.2.1.3.) with the characteristics obtained. The thermophilic fungus Rasamsonia composticola produced amylase from low-cost agro-industrial waste, and purification and characterization demonstrate the enzyme's potential for future biotechnological use |
| Palavras-chave: | Amilase Rasamsonia Compositicola Fungo Termofílico Caracterização Bioquímica |
| Idioma: | por |
| País: | Brasil |
| Editor: | Universidade Federal de Mato Grosso do Sul |
| Sigla da Instituição: | UFMS |
| Tipo de acesso: | Acesso Restrito CC0 1.0 Universal |
| metadata.dc.rights.uri: | http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/ |
| URI: | https://repositorio.ufms.br/handle/123456789/9288 |
| Data do documento: | 18-Nov-2022 |
| Aparece nas coleções: | Ciências Biológicas - Bacharelado (INBIO) INBIO - Ciências Biológicas - Bacharelado |
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