Produção e avaliação preliminar de uma proteína recombinante quimérica para uso no controle de Tristeza parasitária bovina (TPB)

Abstract

A tristeza parasitária bovina é uma importante doença causada pela riquétsia Anaplasma marginale e pelos protozoários Babesia bovis e Babesia bigemina, responsáveis por consideráveis perdas econômicas ao setor agropecuário. Considerando que a vacina comercializada contra os agentes da TPB apresentam muitas desvantagens, foi proposto com este estudo obter uma proteína recombinante quimérica, contendo epítopos com potencial imunogênico, com a finalidade de testá-la posteriormente como candidata a uma nova vacina. Esta proteína recombinante quimérica foi obtida a partir de um gene sintético inserido em um vetor de expressão em organismos procarióticos, contendo porções dos genes VirB9 e VirB10 de A. marginale e P0 de Babesia sp. A proteína recombinante, denominada VIRB9VIRB10P0, foi produzida com alto grau de pureza e confirmada por avaliação em SDS PAGE e Western blotting. Estudos in silico mostraram que essa proteína mantém a antigenicidade em sua conformação recombinante. Soros de 25 bovinos naturalmente infectados com A. marginale e/ou Babesia sp. foram analisados por ELISA indireto para resposta humoral do tipo IgG. Em uma primeira análise, apenas três dos 25 soros dos animais foram capazes de reconhecer a proteína recombinante quimérica VIRB9VIRB10PO. É possível que isso tenha ocorrido porque as porções selecionadas neste estudo foram sintetizadas de modo a conter principalmente epítopos de ligação a MHC classe II, já que estudos sugerem que uma resposta imune capaz de proteger bovinos contra TPB é baseada em uma resposta predominantemente celular. Assim, estudos de resposta imune humoral com uma amostragem maior e análise de reposta celular serão avaliados pela VIRB9VIRB10P0 em imunização de camundongos.

ABSTRACT - The tick fever is an important disease caused by the rickettsia Anaplasma marginale and the protozoa Babesia bovis and Babesia bigemina, causing significant economic losses to the agricultural sector. Taking into account the several disadvantages of the nowadays commercialized vaccine against tick fever agents, this study proposes the production of a recombinant chimeric protein containing potential immunogenic epitopes in order to subsequently test it as a candidate for a new vaccine. This chimeric recombinant protein was then obtained from a synthetic gene containing portions of VirB9 and VirB10 genes of A. marginale and P0 Babesia sp, which were inserted in a prokaryotic expression vector. The recombinant protein, named VIRB9VIRB10PO, was produced at high purity and its identity was confirmed by SDS-PAGE and Western blotting. In silico studies showed that this recombinant protein retains its antigenicity. On the other hand, sera from A. marginale and / or Babesia sp. naturally infected cattle (n=25) were analyzed by ELISA for IgG-type antibody response. Preliminar analysis revealed that only 3 of the 25 sera were able to recognize VIRB9VIRB10PO. This may be explained by the fact that our gene was synthesized to be enriched for MHC class II binding epitopes. In fact, several studies suggest that tick fever immune protection is made predominantly by a cellular-type response. Nevertheless, humoral immune response analysis will be further explored with a higher sampling and cellular responses shall be evaluated by VIRB9VIRB10PO mice immunization.