Glutationa reduzida e centrifugação em gradiente de única camada na lipoperoxidação do sêmen equino criopreservado

Abstract

s objetivos do experimento foram avaliar o efeito antioxidante da glutationa reduzida adicionada ao sêmen equino pré-congelação, nas concentrações de 3 mM, 5 mM e 7 mM, e da centrifugação em gradiente de única camada, após a descongelação, utilizando as formulações comerciais Androcoll-E® e EquipureTM, sobre os níveis de lipoperoxidação. Os ejaculados (n=19) foram congelados em diluente a base de gema de ovo (Botucrio®). Foram avaliadas as variáveis espermáticas: motilidade, vigor, morfologia, viabilidade/status acrossomal, atividade mitocondrial, nível de lipoperoxidação e taxa de recuperação espermática póscentrifugação. As médias dos tratamentos foram comparadas pelos testes de Kruskall-Wallis, Bonferroni, Duncan e t de Student, de acordo com o comportamento dos dados, e analisada a associação da lipoperoxidação com as demais variáveis, pela estimativa dos coeficientes de correlação de Spearman, em nível de 5% de significância. Quando comparados aos valores pós-colheita, a glutationa reduzida nas concentrações de 3 mM e 5 mM apresentou, após a descongelação, um efeito protetor contra a lipoperoxidação (710,2; 636,3 vs. 565,7 ng/108 espermatozoides; P>0,05), no entanto, a concentração de 7 mM mostrou-se tóxica, com menores médias (P<0,05) de motilidade (23% vs. 60%), vigor (1,3 vs. 2,8) e aumento da lipoperoxidação (704,5 vs. 565,7 ng/108 espermatozoides; P<0,05). Após a centrifugação em gradiente de única camada, as amostras apresentaram maiores níveis de lipoperoxidação (P<0,05), independente do gradiente utilizado. Conclui-se que, nas concentrações de 3 mM e 5 mM, a glutationa reduzida apresentou efeito antioxidante durante a criopreservação, sendo a concentração de 7 mM tóxica ao sêmen equino. A centrifugação em gradiente de única camada induziu à lipoperoxidação do sêmen, não sendo observada ação antioxidante da glutationa reduzida durante este procedimento.

The aims of the experiment were to evaluate the antioxidant effect of reduced glutathione added to equine semen before freezing, in the concentration of 3 mM, 5 mM and 7 mM, and submitted to single layer centrifugation gradient, after thawing, on lipid peroxidation, when used two commercial formulations: Androcoll-E TM and Equipure TM. The ejaculates (n=19) were frozen in egg yolk extender (Botucrio®). The sperm variables evaluated were: motility, vigor, morphology, viability and acrosome status, mitochondrial activity, lipid peroxidation and rate of sperm recovery after centrifugation. The treatment means were compared by the Kruskal-Wallis test, Bonferroni, Duncan and Student t tests, according to the data behavior, and analyzed the association of lipid peroxidation with the other variables, by the estimated coefficients of Spearman correlation, at the 5% level of significance. The reduced glutathione at 3 mM and 5 mM presented, after thawing, a protective effect against the lipoperoxidation (710.2; 636,3 vs. 565.7 ng / 108 sperm; P> 0.05), however, 7 mM concentration was found to be toxic, with lower means (P < 0.05) motility (23 % vs. 60 %) and vigor (1.3 vs. 2.8), and increased lipid peroxidation (704.5 vs. 565.7 ng / 108 sperm, P < 0.05) when compared to harvest values. After gradient centrifugation single layer samples had higher levels of lipid peroxidation (P <0.05), regardless of the gradient used. It is concluded that the concentrations of 3 mM and 5 mM, reduced glutathione showed antioxidant effect during cryopreservation, the concentration of 7 mM seems to be toxic to equine semen. The single layer centrifugation gradient induced lipid peroxidation of the semen, no antioxidant action of reduced glutathione during this procedure was observed.