Atividade antibacteriana “in vitro” da própolis produzida no município de Terenos – MS: microrganismos patogênicos e ambiente ruminal

Abstract

Objetivou-se com esse estudo avaliar a atividade antibacteriana in vitro da própolis marrom, produzida em Terenos, estado de Mato Grosso do Sul, Brasil. Esta própolis foi proveniente das plantas: Luehea sp., Piptadenia falcata, Tabebuia spp., Tabebuia caraíba, Vernonia spp. e Cecropia pachystachya. Dois experimentos foram conduzidos, um sobre microrganismos ruminais e outro sobre patógenos clínicos. O extrato alcoólico de própolis 35% (35 g de própolis bruta macerada e 65 mL de álcool de cereais) apresentou 29,90 mg/mL de cera, 151,28 mg/mL de resíduo seco, 27,65 mg/mL de fenóis totais e 13,95 mg/mL de flavonoides totais. No primeiro ensaio avaliou-se a atividade antibacteriana do extrato de própolis por meio da determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) pela técnica de sensibilidade por microdiluição. Foram utilizados 32 isolados de bactérias Gram-positivas: Rhodococcus equi, Staphylococcus aureus, Staphylococcus hyicus, Staphylococcus spp., Streptococcus spp., e 32 isolados de bactérias Gram-negativas: Enterobacter agglomerans, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella sp., Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas spp., Salmonella spp. e Serratia rubidaea. Todas as amostras de bactérias foram obtidas de processos clínicos infecciosos de animais domésticos, mantidas congeladas a -20oC, com criopreservante glicerol v/v. O extrato de própolis apresentou atividade antimicrobiana com uma CIM variando de 2,25 a 18,9 mg/mL para as bactérias Gram-positivas e de 4,5 a 18,9 mg/mL para as bactérias Gram-negativas. Conclui-se que esta própolis tem ação bactericida, porém, o efeito depende da espécie do microrganismo e de sua procedência. No segundo ensaio, avaliou-se a inclusão do extrato de própolis em quatro diluições em água (0-50-70-100%) e doses (4; 8; 12; 16 e 20 mL/kg de MS de ração), por meio da produção cumulativa de gases in vitro ajustada nos modelos Logístico Bicompartimental e Exponencial. A ração foi composta por 40 g/kg de feno de capim-Tifton e 60 g/kg de concentrado. As amostras foram incubadas por 96 horas. O delineamento estatístico foi inteiramente casualizado em esquema fatorial, com quatro tratamentos e cinco doses, em triplicata. Houve interação significativa entre tratamento e dose para degradabilidade da MS, com o tratamento sem aditivo foi igual a 678,55 g/kg e o tratamento com Álcool-puro apresentou efeito exponencial negativo com 303,61 g/kg para a dose de 20 mL/kg MS. O Extrato 100% apresentou os maiores valores de degradabilidade, com máximo estimado em 18,93 mL/kg MS. O Extrato 70% apresentou mínima de 6,35 mL/kg MS e o Extrato-50% 7,65 mL/kg MS. Houve efeito de tratamento e de dose sobre a produção de gases. O Tratamento Álcool-puro apresentou potencial de redução de -0,32 mL de gás para cada mL de álcool adicionado. No Extrato 70% a máxima estimativa foi 11,43 mL e 12,60 mL respectivamente para os modelos Bicompartimental e Exponencial. No Extrato 100% as máximas foram 13,10 mL e 12,07 mL de extrato, respectivamente, com as maiores estimativas de produção de gases, com valores acima de 30 mL de gás/100mg de MS fermentada. O extrato alcoólico de própolis tem ação positiva sobre a degradabilidade e produção de gases. Sugere-se a utilização de 13 mL/kg MS do extrato alcoólico de própolis 35%, para rações com relação volumoso:concentrado igual a 40:60 para bovinos.

ABSTRACT - This study had the objective of evaluate the in vitro antibacterial activity of brown propolis, that was produced in Terenos, Mato Grosso do Sul State, Brazil. This propolis was obtained from the following plants: Luehea sp., Piptadenia falcata, Tabebuia spp., Tabebuia caraiba, Vernonia spp. and Cecropia pachystachya. Two experiments were conducted about rumen microorganisms and clinic pathogens. The alcoholic extract of propolis 35% (35g of macerated raw propolis and 65 mL of alcohol) had 29.90 mg/mL of wax, 151.28 mg/mL of dry residue, 27.65 mg/mL of total phenols and 13.95 mg/ml of total flavonoids. In the first experiment, the antibacterial activity of propolis extract was evaluated by determining the minimum inhibitory concentration (MIC) by the technique of sensitivity using microdilution. Thirty-two isolates of Gram-positive bacteria were used: Rhodococcus equi, Staphylococcus aureus, Staphylococcus hyicus, Staphylococcus spp., Streptococcus spp. The thirty-two isolated Gram-negative bacteria were: Enterobacter agglomerans, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella spp., Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas spp, Salmonella spp. and Serratia rubidaea. All bacterial samples were obtained from clinical infectious processes from domestic animals, that were frozen at -20 °C with glycerol criopreservante v/v. The propolis extract showed antibacterial activity with a MIC ranging from 2.25 to 18.9 mg/mL for the Gram-positive bacteria and from 4.5 to 18.9 mg/mL for the Gram-negative bacteria. It was concluded that propolis had antibacterial action, but the effect depends on the species of the bacteria and its origin. In the second experiment, it was evaluated the inclusion of propolis extract in four dilutions in water (0-50-70-100%) and doses (4, 8, 12, 16 and 20 mL/kg DM diet) through the cumulative gas production in vitro technique using adjusted Logistic Bicompartimental and Exponential models. The substrate was composed of 40 g/kg Tifton hay and 60 g/kg of concentrate. The samples were incubated for 96 hours. The statistical design was a completely randomized factorial design with four treatments and five doses in triplicate. There was a significant interaction between treatment and dose for DM degradability. Treatment without additive was 678.55 g/kg. Alcohol-pure treatment showed a negative exponential effect with 303.61 g/kg for the dose of 20 mL/kg DM. The Extract 100% showed the highest values of degradability, with maximum estimated at 18.93 mL/kg DM. The Extract 70% showed minimum 6.35 mL/kg DM and Extract 50% 7.65 mL/kg DM. There was effect of treatment and dose on the gas production. The Alcohol pure Treatment presented reduction potential of -0.32 mL gas for each ml of alcohol added. For the Extract 70% the maximum estimative was 11.43 mL and 12.60 mL for the models Bicompartimental an Exponential, respectively. For the Extract 100% on-peak was 13.10 mL and 12.07 mL for the Bicompartimental and Exponential models, respectively, with the highest estimative of gas production, with values above 30 mL gas/100 mg fermented DM. The alcoholic extract of propolis has a positive action on the degradability and gas production. It's possible to suggest using 13 ml of alcoholic extract of propolis 35%, for diets with proportion roughage:concentrate equal 40:60 for cattle.