Prevalência de DNA genômico para Staphylococcus epidermidis plasmo coagulase negativa em neonatos pré-termo maiores de três dias de vida e com quadro de piora de infecção

Abstract

Introdução: A infecção neonatal (IN) é uma importante causa de morbidade e mortalidade em RNs no período neonatal. Um dos agentes infecciosos importantes na infecção hospitalar, mas sem dados conclusivos é o Staphylococcus epidermidis, cuja incidência é pouco conhecida na IN. Objetivo: O presente estudo objetivou identificar esta bactéria em sangue de RNs através da reação em cadeia da polimerase convencional (PCR) e em tempo real (qPCR) e verificar sua incidência. Material e Método: Foi coletado um total de 45 amostras de sangue periférico para hemocultura convencional (Bact/ALERT), e extração do DNA genômico de leucócitos. Aproximadamente 50 ng (54 ±40 ng) de DNA foram utilizados no diagnóstico molecular por PCR e qPCR. Oligonucleotídeos iniciadores para PCR e qPCR foram desenhados para obtenção de amplicons específicos de 119 pb e 96 pb, respectivamente, para diagnóstico de S.epidermidis. A qPCR foi realizada no equipamento ABI Prism 7000 SDS e as condições da reação segundo o protocolo do SybrGreen Core Reagent Mix. Resultado: A hemocultura foi capaz de detectar S.epidermidis em 13,3% das amostras investigadas, enquanto PCR convencional detectou 17,8% e qPCR 100% de amplicons alvos de S. epidermidis em DNA das amostras positivadas pelo método da PCR Convencional. Conclusão: Os resultados da qPCR mostraram maior sensibilidade para a detecção de S. epidermidis no sangue e deverá ser uma ferramenta fundamental para futuras triagens em estudos epidemiológicos mais amplos na suspeita de sepse neonatal. Os fatores de risco juntamente com observações clínicas e hemocultura, aliados à PCR, serão mais eficientes para precisão diagnóstica e direção do tratamento específico.

Introduction: The neonatal infection (IN) is an important cause of morbidity and mortality in newborns in the neonatal period. One of the major infectious agents but no conclusive data is Staphylococcus epidermidis, the incidence of which is little known in IN. Object: This study aimed to identify the bacteria in the blood of newborns by polymerase chain reaction conventional (PCR) and real-time (qPCR), and check its incidence. Material and Methods: Was collected 45 peripheral blood samples for conventional blood culture (BacT / ALERT 3D60), and genomic DNA extraction from leukocytes. Approximately 50 ng (54 ±40 ng) of DNA was used for PCR in molecular diagnostics and qPCR. Oligonucleotide primers for PCR were designed and qPCR to obtain specific amplicons of 119 bp and 96 bp respectively for diagnosis of S. epidermidis. The qPCR was performed in the ABI Prism 7000 SDS equipment and reaction conditions according to the protocol of SybrGreen Core Reagent Mix. Result: Blood culture was able to detect S. epidermidis in 13,3% of the samples investigated, while conventional PCR detected 17,8% and qPCR 100% of target S. epidermidis DNA by the conventional PCR method. Conclusion: qPCR results showed increased sensitivity for the detection of S. epidermidis in the blood and will be a fundamental tool for future screening in broader epidemiological studies of suspected neonatal sepsis. Risk factors together with clinical observations and blood culture, coupled with PCR, will be more efficient for diagnostic accuracy and specific treatment direction.