Clonagem, expressão e caracterização do domínio antigênico da proteína majoritária de superfície NcRS2 (Nc1-p43) recombinante de Neospera caninum

Abstract

Neospora caninum é um protozoário intracelular obrigatório que pode infectar canídeos domésticos e selvagens, ruminantes e eqüinos, tendo sido descrito em 1988 por DUBEY et al. (1988), como causador de alterações neuromusculares e morte em cães. Recentemente, N. caninum vem recebendo atenção especial por seu grande impacto na indústria do leite, acarretando perdas econômicas relacionadas com falhas reprodutivas e com o decréscimo da produtividade. O diagnóstico de neosporose com teste ELISA não é amplamente utilizado no Brasil, principalmente devido ao custo do ensaio, e por isso o status da distribuição da neosporose nas diferentes regiões do país não é suficientemente conhecido. Com o objetivo de avaliar a habilidade de reagir com soros de animais infectados provenientes de Mato Grosso do Sul, foi produzido uma região domínio com um determinante antigênico de uma importante proteína de superfície (Nc-p43). O domínio antigênico dessa proteína está localizado na região 2/3 distal do C-terminal e foi amplificado por reação de polimerase em cadeia. O fragmento de DNA foi clonado em um vetor pet100/D-TOPO. O plasmídio recombinante foi transformado em Escherichia coli da variedade BL21 Star (DE3) e induzido a expressar o fragmento protéico de Nc-p43 como uma proteína de 29 kDa quando em contato com soro positivo para Neospora, mostrou-se sensível na identificação por immunoblotting. Tal fragmento de Nc-p43 pode ter uso em futuros estudos voltados ao diagnóstico de infecção por N. caninum e à avaliação de sua imunoproteção a possíveis hospedeiros.